Alex Marquez menegaskan pada Kamis bahwa dia akan berkendara lebih bebas setelah mengamankan posisi runner-up. Hal ini terbukti dalam hari pertama MotoGP Portugal di mana pembalap Gresini mendominasi. Alex Marquez menjadi pembalap tercepat di sesi latihan pertama (FP1) dengan waktu 1:39,145 dan di sesi latihan, di mana dia mencetak waktu 1:37,974. Meskipun waktu itu di bawah 1:38, namun masih jauh dari rekor tahun 2023 yang dipegang Marc Marquez dengan waktu 1:37,226. Meski cuaca tidak begitu mendukung dengan hujan rintik-rintik, para pembalap tetap berusaha maksimal.
Francesco Bagnaia, yang sempat lambat di sesi latihan pagi, berhasil memperbaiki catatannya di sore hari dengan waktu tercepat 1:38,004, mengalahkan Pedro Acosta yang menempati posisi ketiga di atas KTM. Pembaruan waktu juga terlihat dari Marco Bezzecchi yang finis di urutan keempat, di depan Joan Mir yang mengendarai Honda. Moto GP juga menunjukkan peningkatan dari motor berbasis di Tokyo dengan Johann Zarco masuk ke Q2 dalam posisi keenam.
Di urutan ketujuh terdapat Fermin Aldeguer, diikuti oleh Pol Espargaro dan Ai Ogura yang merupakan rookie asal Jepang. Namun, pembalap yang mengalami cedera seperti Raul Fernandez dan Maverick Viñales harus absen dari sesi tersebut. Dalam sesi ini, pembalap Yamaha gagal menempatkan motornya di posisi sepuluh besar, termasuk Fabio Quartararo yang berada di urutan ke-13. Situasi ini memaksa pembalap asal Prancis tersebut untuk mengikuti Q1.
Meski mengalami kecelakaan di pagi hari, Raul Fernandez berhasil kembali ke lintasan dan menyelesaikan 17 lap dengan cukup mulus. Sementara itu, Bulega menunjukkan peningkatan dengan menempati posisi ke-17, terpaut satu detik dari Alex Marquez. Ini merupakan hasil practice MotoGP Portugal 2025 yang membuktikan persaingan yang menarik di lintasan MotoGP.
